Princípio:
- Membros dos gêneros anaeróbicos Clostridium e Desulfotomaculum e o gênero aeróbico Bacilo são exemplos de organismos que têm a capacidade de existir como células vegetativas metabolicamente ativas ou como tipos de células altamente resistentes e metabolicamente inativos chamados esporos. Quando as condições ambientais se tornam desfavoráveis para as atividades celulares vegetativas contínuas, particularmente com a exaustão de uma fonte de carbono nutricional, essas células têm a capacidade de sofrer esporogênese e dão origem a uma nova estrutura intracelular chamada Endospore, que é cercada por camadas impermeáveis chamadas camadas de esporos. À medida que as condições continuam a piorar, o endosporo é liberado da célula vegetativa degenerativa e se torna uma célula independente chamada esporo livre. Devido à composição química das camadas de esporos, o esporo é resistente aos efeitos prejudiciais do calor excessivo, congelamento, radiação, dessecação e agentes químicos, bem como às manchas microbiológicas comumente empregadas. Com o retorno de condições ambientais favoráveis, o esporo livre pode reverter para um metabolicamente ativo
e células vegetativas menos resistentes através da germinação. Deve -se enfatizar que a esporogênese e a germinação não são meios de reprodução, mas apenas mecanismos que garantem a sobrevivência celular em todas as condições ambientais.
Na prática, a mancha de esporos usa duas manchas diferentes e os agentes descolorantes:
1. Mancha primária (verde malaquita):
- Ao contrário da maioria dos tipos de células vegetativas que mancham por procedimentos comuns, o esporo livre, por causa de seus casacos impermeáveis, não aceitará a mancha primária facilmente. Para uma maior penetração, é necessária a aplicação de calor. Depois que a mancha primária é aplicada e a mancha é aquecida, a célula vegetativa e o esporo parecerão verdes.
2. O agente descolorante (água):
- Uma vez que o esporo aceita o verde malaquita, ele não pode ser descolorido pela água da torneira, que take away apenas a mancha primária em excesso. O esporo permanece verde. Por outro lado, a mancha não demonstra uma forte afinidade pelos componentes celulares vegetativos; A água o take away, e essas células serão incolores.
3. Counter mancha (safranina):
- Essa mancha vermelha contrastante é usada como o segundo reagente para colorir as células vegetativas descoloridas, que absorverão a contra -alfinete e parecerão vermelhas. Os esporos retêm o verde da mancha primária.
Requisitos
- eu). Cultura bacteriana: 48-72 hrs Agar nutriente Cultura de Bacillus cereus e cultura de tioglicolate de Clostridium sporogenes.
- ii. Reagentes: Verde malaquita e safranina.
- iii. Equipamento: Microincinerator ou Burnen Burnerhot Placa, bandeja de coloração, loop inoculando, lâminas de vidro, papel bibuloso, papel de lente e microscópio.
Procedimento para coloração de esporos:
- Obtenha dois deslizamentos de vidro limpos.
- Faça manchas individuais da maneira ordinary usando a técnica asséptica.
- Deixe esfregar o ar e a correção de calor da maneira ordinary.
- Esmera de inundação com verde malaquita e coloque em cima de um copo de água sentado em um prato quente quente, permitindo que a preparação do vapor por 2 a 3 minutos. Nota: Não permita que a mancha evapore; Reabasteça a mancha conforme necessário. Impedir que a mancha ferva, ajustando o quente
temperatura da placa. - Retire os slides da placa quente, esfrie e lave sob água da torneira em funcionamento.
- Contrestas com safranina por 30 segundos.
- Lave com água da torneira.
- Seque com papel bíblico e look at a imersão em óleo.
- No gráfico fornecido no relatório do laboratório, full o seguinte:
- Desenhe um campo microscópico representativo de cada preparação.
- Descreva a localização do endospore dentro da célula vegetativa como central, subterminal ou terminal em cada preparação.
- Indicar a cor do esporo e da célula vegetativa em cada preparação
