27.3 C
Nova Iorque
quarta-feira, agosto 13, 2025

Isolamento de microorganismos produtores de antibióticos e determinação de espectro antimicrobiano de isolados



Princípio:

  • O solo é o principal armazenamento dos microorganismos que produzem Antibióticos que são capazes de inibir o crescimento de outros microorganismos. Antibióticos foram implementados em uma ou em outras formas há séculos. A triagem de isolados selvagens do solo produziu a ampla maioria dos novos antibióticos. Mesmo que a purificação de várias centenas de antibióticos produzidos naturalmente tenha sido realizada, apenas alguns se mostraram bem -sucedidos para serem usados na prática médica. Aqueles que atualmente são de maior uso foram derivados de um grupo comparativamente pequeno de microorganismos pertencentes aos gêneros Penicillium, Streptomyces, Cephalosporium, Micomonospora e Bacillus. Nesta época, os esforços contínuos para desenvolver novos antibióticos são as tendências emergentes.
  • Mesmo que os solos de várias partes do mundo sejam rastreados continuamente em laboratórios industriais, a fim de isolar novos microorganismos produtores de antibióticos, a microbiologia industrial está direcionando seus esforços para a modificação química das substâncias antibióticas existentes. Isso é concluído adicionando ou substituindo cadeias laterais químicas, reorganizando a ligação intramolecular ou produzindo cepas microbianas mutantes capazes de excretar uma forma mais potente do antibiótico. O estabelecimento de congêneres químicos é responsável pela superação da resistência a antibióticos, reduzindo os efeitos colaterais adversos no hospedeiro e aumentando o espectro efetivo de um determinado antibiótico.
  • EU: Usaremos a técnica de placa lotada para o isolamento de microorganismos de produção de antibióticos de duas amostras de solo, uma das quais é semeada com Streptomyces griseus servir como um controle positivo.
  • Ii: Para a determinação do espectro antimicrobiano de isolados, os isolados que manifestam atividade antibiótica serão examinados contra vários microorganismos diferentes para estabelecer sua eficácia.

I. Isolamento de microorganismos produtores de antibióticos

Requisitos:

  1. Suspensões do solo:
    • – 1: 500 Diluição da suspensão da amostra do solo (0,1 g de solo por 50 ml de água da torneira) para servir como um desconhecido
    • – 1: 500 diluição da amostra de solo semeada com S. Griseus (0,1 g de solo por 50 ml de água da torneira) para servir como controle positivo.
  2. Mídia:
    • Seis tubos profundos de ágar de soja tripticase de 15 ml e duas inclinações de ágar de soja tripticase.
  3. Equipamento:
    -copo de 500 ml
    – Tubos de teste
    – rack de tubo de ensaio
    – Platações estéreis de Petri
    – Inocular a agulha
    – Placa quente
    – Termômetro
    -pipetas de 1 ml e 5 ml
    – Dispositivo de pipeting mecânico
    – Lente da mão de ampliação.

Procedimento para isolamento de microorganismos de produção de antibióticos

  • Rotule dois conjuntos de três placas de Petri estéreis com os tipos de amostras de solo sendo usadas e diluições (1: 1000, 1: 2000 e 1: 4000).
  • Coloque seis tubos profundos de ágar de soja tripticase em um copo de água e leve para 100 ° C em uma placa quente. Quando o ágar for liquefeito, adicione água fria ao banho de água. Esfriar a forty five ° C, verificando a temperatura com um termômetro.
  • Put together uma diluição em série do controle desconhecido e positivo 1: 500 amostras de solo da seguinte forma:
    – Rotule três tubos de teste 1, 2 e 3. Com uma pipeta, adicione 5 ml de água da torneira a cada tubo.
    -Shake a amostra fornecida de 1: 500 do solo completamente por 5 minutos para efetuar uma suspensão uniforme da água do solo.
    -Usando uma pipeta de 5 ml, transfira 5 ml da diluição 1: 500 para o tubo 1 e misture. A diluição closing é 1: 1000.
    – Usando outra pipeta, transfira 5 ml do tubo 1 para o tubo 2 e misture. A diluição closing é 1: 2000.
    – Usando outra pipeta, transfira 5 ml do tubo 2 para o tubo 3 e misture. A diluição closing é 1: 4000.
    -Usando pipetas separadas de 1 ml, transfira 1 ml das diluições 1: 1000, 1: 2000 e 1: 4000 para suas placas de Petri adequadamente rotuladas.
    – Despeje um tubo de ágar de soja tripticase fundido, resfriado a forty five ° C, em cada placa e misture por rotação suave.
    – Permita que todas as placas solidifiquem.
  • Incubar todas as placas em uma posição invertida por 2 a 4 dias a 25 ° C.
  • Study todas as diluições de placa lotada para colônias que exibem zonas de inibição do crescimento. Use uma lente de ampliação handbook, se necessário. Registro no relatório do laboratório O número de colônias mostrando zonas de inibição.
  • Iseticamente isole uma colônia mostrando uma zona 34 de inibição do crescimento de cada cultura do solo
    com uma agulha de inoculação e listras
    As inclinações de ágar de soja tripticase marcadas com a amostra de solo da qual o isolado foi obtido
  • Incubar as inclinações por 2 a 4 dias a 25 ° C. Isso servirá como culturas de estoque de isolados produtores de antibióticos a serem usados na Parte B.

Ii. Determinação do espectro antimicrobiano de isolados

Requisitos:

  1. Culturas:
    • -Culturas de caldo de soja tripticase 24 horas de 24 horas de Escherichia coliAssim, Staphylococcus aureusAssim, Mycobacterium smegmatise Pseudomonas aeruginosa.
  2. Mídia:
    Duas placas de ágar de soja tripticase.
  3. Equipamento:
    – Bunsen Burner
    – Inocular loop
    – Lápis de marcação de vidro.

Procedimento para determinação do espectro antimicrobiano de isolados.

  • Rotule as placas de ágar de soja tripticase com a fonte da amostra do solo do isolado.
  • Usando a técnica asséptica, faça uma inoculação de faixa de linha única de cada isolado na superfície de uma placa de ágar, de modo a dividir a placa ao meio
  • Incubar as placas em uma posição invertida por 3 a 5 dias a 25 ° C.
  • Após a incubação, no fundo de cada placa desenha quatro linhas perpendiculares ao crescimento do isolado produtor de antibióticos
  • Assepticamente fazem uma inoculação de faixa de linha única de cada uma das quatro culturas de teste após o modelo de inoculação em cada placa. Comece perto de, mas não tocando, o crescimento do isolado produtor de antibióticos e estivesse em direção à borda da placa.
  • Incubar as placas em uma posição invertida por 24 horas a 37 ° C.
  • Study todas as placas para inibição dos organismos de teste e registre suas observações no relatório do laboratório.

Observações e interpretações de resultados:

  • I: Isolamento de microrganismos produtores de antibióticos.
    -O número de colônias mostrando a zona de inibição em diferentes diluições em série foi observado e foi cultivado ainda mais para obter culturas puras.
  • II: Determinação do espectro antimicrobiano de isolados.
    • Desenhe uma representação da atividade antibiótica observada contra os organismos de teste.
    • Com base em suas observações, registre no gráfico a presença (+) ou ausência ( -) da atividade antibiótica contra cada um dos organismos de teste e o espectro da atividade antimicrobiana (ampla ou estreita).

Related Articles

LEAVE A REPLY

Please enter your comment!
Please enter your name here

Latest Articles