Os óleos de imersão melhoram a resolução e o brilho das imagens visualizadas através de um microscópio, devido às suas características ópticas e de viscosidade.
A microscopia não teria avançado para onde está hoje sem o uso de óleo de imersão. Sem ele, o poder de resolução dos microscópios de luz para revelar os detalhes das células teria atingido uma parede de tijolos.
Takeaways -chave
-
Os óleos de imersão aumentam a ampliação e o contraste da microscopia leve
-
Eles ajudam a preservar a clareza e detalhes da imagem, reduzindo a distorção da luz
-
Óleos com um alto índice de refração funcionam melhor para focar a luz sem desfoque
Como os óleos de imersão funcionam
Os óleos de imersão são usados em microscopia leve para aumentar a resolução Poder dos microscópios de luz. Esses óleos são transparentes e têm um alto índice de refração, o que significa que podem aumentar significativamente a ampliação e o contraste de uma amostra sob um microscópio. Isso ajuda a obter imagens mais claras e detalhadas com maior ampliação do que sem esse meio.
Normalmente, os óleos de imersão têm um Índice de Refração sentado em um proporção de 1,1515, medida Em termos da razão entre o ângulo de refração em um meio e o ângulo de incidência de luz da fonte em relação a uma linha imaginária perpendicular ao meio, como mostrado na ilustração abaixo.
O índice de refração também é medido em termos da razão entre a velocidade da luz no vácuo e a velocidade da luz em um meio. Essa definição é mais precisa, mas mais difícil de medir experimentalmente. De um modo geral, um maior O índice de refração significa que a luz é mais lenta e pode ser dobrada mais no meio.
Quais são os tipos de óleo de imersão?
Os óleos de imersão são classificados com base em sua clareza, aplicações e viscosidade, que é medido em centristocos. Uma ampla gama de óleos sintéticos está disponível comercialmente para várias aplicações de microscopia.
Diferentes países têm seus próprios padrões de qualidade, mas o padrão mais reconhecido para o petróleo de imersão é especificado pela Organização de Padrões Internacionais em seu ISO 8036 padrão para óleos de imersão destinado a fins gerais. As especificações são as seguintes:
- NE = 1,5180 ± 0,0005 (nd = 1,515)
- VE = 44 ± 3 (número abbe – uma medida de dispersão)
- Temperatura = 23 ± 0,1 graus centígrados
Aqui estão alguns dos tipos comuns de óleos de imersão Com base em viscosidade e aplicações:
- Tipos A e B: Estes têm uma viscosidade de 150 a 1.250 centristocos. Você pode misturar os tipos A e B para obter viscosidades intermediárias.
- Tipo NVH: Estes são óleos de imersão em alta viscosidade com níveis de viscosidade de 21.000 centistocos.
- Tipo OVH: Esses óleos de imersão têm uma viscosidade muito alta em 46.000 centistocos. Eles são ideais para instrumentos invertidos, inclinados e de foco longo.
- Tipos de microscopia de fluorescência: Os óleos de imersão usados para microscopia de fluorescência são tipos de LDF, HF e FF. Eles têm viscosidades de 500 centistocos, 700 centistocos e 170 centistocos, respectivamente.
- Tipo 37: Isso possui um índice de refração de 1,515 e uma viscosidade de 1.250 centristocos, semelhante ao tipo B. No entanto, é estável acima da temperatura de calibração padrão de 23 ° C e foi projetada para permanecer estável a 37 ° C. A qualidade da imagem é preservada mesmo nesta temperatura.
Benefícios do óleo de imersão
Talvez o benefício mais importante do óleo de imersão seja sua capacidade de melhorar a qualidade e a ampliação da imagem. Ao reduzir a dispersão da luz, os óleos de imersão permitem que os microscópios capturem mais luz da amostra que estão estudando.
Isso é important ao visualizar estruturas muito pequenas, como bactérias ou células, onde a clareza pode ser a diferença entre diagnósticos ou descobertas sendo identificadas ou perdidas.
Além disso, alguns outros benefícios importantes incluem:
- Aumentando a abertura numérica da lente, ampliação de aumento Para vistas mais claras em alta potência
- Combinando o índice de refração do vidro, prevenção de distorção e preservação da precisão da imagem
- O petróleo aumenta o contraste, ajudando Detalhes mais finos se destacam contra o fundo
- O óleo de imersão ajuda a alcançar maior resolução concentrando a luz de maneira mais eficaz
- Em altas magnificações, o óleo de imersão garante Qualidade máxima da imagem permitindo uma melhor reunião de luz
Quais são os usos do óleo de imersão?
Os óleos de imersão são usados para vários tipos de microscopia. Eles têm um alto índice de refração, o que os permite ser mais eficazes na luz flexível. Isso ajuda a alcançar imagens mais claras e detalhadas, especialmente em altas magnificações.
Sem óleo de imersão, as ondas leves podem se espalhar quando passam pela amostra e pelo lâmina de vidro, levando a desfoque e uma perda de detalhes. O óleo preenche a lacuna entre a lâmina e a lente, garantindo que a luz proceed sem distorção, levando a uma imagem ampliada mais clara e precisa.
Esse processo também ajuda a impedir que a luz seja refratada em ângulos indesejados, o que de outra forma poderia degradar a qualidade da imagem.
Cada tipo de microscopia normalmente requer um tipo diferente de óleo de imersão, que depende principalmente dos detalhes que precisam ser revelados:
- Microscopia de luz regular: Este é o tipo mais comum de microscopia que usa fontes de luz normais, como luz photo voltaic ambiente ou luz de uma lâmpada elétrica. Ele usa dois tipos de óleos de imersão, sendo um mais viscoso que o outro. Estes são óleos de imersão de uso geral que podem ser combinados entre si para produzir viscosidades intermediárias.
- Microscopia de óleo de alta viscosidade: Os óleos utilizados para esse fim têm uma viscosidade de 21.000 centistocos. Esse tipo de óleo de imersão é usado para montagens de amostras invertidas, horizontais e inclinadas. Também é usado para objetivos e amostras de longa distância de trabalho que usam condensadores com lacunas amplas.
- Microscopia de fluorescência (Tipo df): Os óleos de imersão usados para esse tipo de microscopia fornecem a maior resolução e produzem uma cor de fundo verde pálido. Em algumas configurações, a luz a laser é usada com um tolueno-interface da água.
- Microscopia de fluorescência (tipo FF): Para esta aplicação, um óleo aprimorado é usado sem fluorescência de fundo. O óleo é cristalino e não higroscópico. Este óleo também pode ser usado em outros tipos de microscopia de fluorescência, tornando -o um óleo common.
A viscosidade e o índice de refração do óleo são essenciais para sua eficácia. Com um índice de refração de cerca de 1,515, os óleos de imersão ajudam a focar a luz com mais precisão, o que, por sua vez, melhora a qualidade da imagem.
Usando objetivos secos versus óleo de imersão
Há momentos em que usando um objetivo seco é mais apropriado do que usar um óleo de imersão. Isso inclui visualizações mais baixas de energia, onde os objetos não requerem níveis precisos de aprimoramento para fazer uma avaliação.
Alguns outros profissionais do uso de objetivos secos incluem:
- Não há necessidade de óleo adicional ou preparação especial, tornando -os rápidos e fáceis de usar
- Objetivos secos podem ser usados com qualquer slide sem se preocupar com a compatibilidade ou limpeza de óleo
- Eles geralmente são mais baratos que os óleos de imersão
- Não há necessidade de se preocupar com o petróleo na lente ou na lente, o que requer limpeza
Enquanto isso, esses são os contras dos objetivos secos:
- Os objetivos secos reúnem menos luz, resultando em menor resolução e menos detalhes em altas magnificações
- Os objetivos secos de alta ampliação podem não fornecer a clareza necessária para visualizar detalhes finos
- Eles são menos eficazes para aumentar o contraste, especialmente para imagens de alta resolução
Enquanto discutimos muitos dos positivos dos óleos de imersão até agora, é importante observar que eles têm algumas desvantagens, incluindo:
- Preparação further: o uso de óleo de imersão requer aplicação e limpeza do óleo após o uso
- Eles podem ficar bagunçados: o petróleo pode entrar na lente ou deslizar, exigindo limpeza completa para evitar contaminação ou dano
- Custo: o óleo de imersão e os objetivos necessários são tipicamente mais caros que os objetivos secos
Conclusão
O óleo de imersão desempenha um papel important na microscopia moderna, melhorando a qualidade da imagem, aumentando o contraste e aumentando a ampliação. Sua capacidade de focar a luz de maneira eficaz e reduzir a distorção garante que os cientistas possam observar até os detalhes mais complexos das amostras.
A escolha do óleo de imersão correta para a tarefa em questão é essential, pois afeta diretamente a qualidade dos resultados e ajuda a minimizar os negativos do uso desse meio.
