de Irene Karapidaki, Béryl Laplace-Builhé e Michalis Averof
O que é isso?
Estes são embriões de crustáceos injetados com mRNA que codifica uma proteína fluorescente vermelha ligada às membranas. À esquerda, a proteína fluorescente está localizada na membrana plasmática, à direita está presa no retículo endoplasmático e/ou Golgi.
Como essa imagem foi feita?
Estas imagens foram feitas durante o teste de diferentes tags de localização de membrana no crustáceo marinho Parhyale hawaiensis. Embriões em estágio unicelular foram injetados com mRNAs que codificam mScarlet3 fundidos a uma etiqueta Lyn, direcionando a miristoilação e palmitoilação da proteína (à esquerda), ou um peptídeo sinal e o domínio transmembranar CD8 (à direita). Os embriões foram deixados crescer por um dia e depois fotografados ao vivo em um microscópio confocal.
Por que as pessoas deveriam se preocupar com isso?
Direcionar proteínas fluorescentes para as membranas celulares nos permite visualizar a forma e o comportamento das células em embriões vivos, à medida que constroem o corpo. Veja, por exemplo, este filme incrível, que mostra a coreografia das células enquanto elas constroem os órgãos sensoriais no embrião do peixe: https://thenode.biologists.com/ready-steady-cooooooonga/analysis/
Posso fazer isso no meu organismo de pesquisa favorito?
O problema é que as etiquetas existentes de localização de membrana não funcionam igualmente bem em todas as espécies. A etiqueta SP-CD8, por exemplo (à direita), fornece boa localização na membrana plasmática em Drosófilamas fica preso na through secretora do nosso crustáceo (Parhyale) embriões. Em organismos modelo não convencionais, é necessário testar várias tags para encontrar uma boa.
Para facilitar esse processo, geramos um package de ferramentas de 11 marcadores de localização de membrana, que podem ser rastreados rapidamente por microinjeção de mRNA na sua espécie de interesse. A comparação dos resultados obtidos em diferentes espécies ajudará a identificar marcadores que funcionam bem numa vasta gama de eucariotas. Caso tenha interesse em experimentar o toolkit e participar da nossa tela comparativa, entre em contato.
Onde posso encontrar mais sobre isso?
Dê uma olhada em nossa pré-impressão: https://www.biorxiv.org/content material/10.1101/2024.11.12.623055v1
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