A triagem extremely -alta rendimento dos rendimentos de DNA polimerase melhorada

A amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP), uma técnica de amplificação de DNA avaliada por sua velocidade, especificidade, sensibilidade e simplicidade, é cada vez mais empregada no diagnóstico de doenças e na detecção de organismo geneticamente modificada. No coração deste método, encontra -se a BST DNA polimerase, cujas propriedades enzimáticas – como atividade de deslocamento da fita, termostabilidade e eficiência catalítica – são críticas para o sucesso da amplificação isotérmica, normalmente realizada a 60-65 ° C.

Um grupo de pesquisa liderado por Ma Fuqiang do Instituto de Engenharia e Tecnologia Biomédica (SIBET) da Suzhou da Academia Chinesa de Ciências, há muito tempo se comprometeu com a modificação molecular enzimática e as tecnologias de triagem de gotas de fluorescência (Extremely-Excessive-Alto. Com base na tecnologia de microfluídicos de gotículas, essa plataforma pode rastrear grandes bibliotecas mutantes no nível de célula única, com uma taxa de transferência diária de mais de 10 milhões de mutantes.

Usando esta plataforma, os pesquisadores projetaram um protocolo de triagem ultra-alto para o DNA do BST Polimerase com base na microfluídica de célula única ativada por fluorescência.

O trabalho é publicado no diário Catálise da ACS.

Pela primeira vez, esse método foi aplicado à evolução direcionada da polimerase BST, resultando na identificação de enzimas mutantes com atividade significativamente aprimorada. Quando integrados em ensaios de lâmpada, esses mutantes reduziram o tempo de emergência de pico da reação e demonstraram melhorar Estabilidade térmicapermitindo o armazenamento enzimático estendido.

Como resultado, alcançou um salto do tipo selvagem enzima a enzimas valiosas comercialmente, demonstrando totalmente o grande potencial da tecnologia FADS na eficiente eficiente de enzimas moleculares.