Compreender como as células únicas expressam proteínas e outros produtos genéticos revolucionaram a biologia, mas entender essas células únicas em seu contexto de tecido permaneceu tecnicamente desafiador. Pesquisadores do Instituto de Tecnologia de Massachusetts (MIT) desenvolveram um método de rotulagem de anticorpos que, segundo eles, permitirá imagens de proteínas de célula única em tecidos intactos (Nat. Biotechnol. 2025, doi: 10.1038/S41587-024-02533-4).
Encontrar proteínas específicas em tecido denso usando um rótulo de anticorpo é difícil porque os anticorpos demoram a difundir através do tecido, mas rapidamente reagirem com seus alvos. Como uma pessoa que chega a uma festa que pretende se misturar, mas é absorvida em conversas dentro da porta da frente, os anticorpos tendem a se concentrar nas margens dos tecidos e nunca encontram alvos mais profundos por dentro. Para superar a rotulagem desigual, os pesquisadores costumam seccionar órgãos em fatias apenas alguns mícrons de largura, sacrificando algum contexto espacial.
Os pesquisadores do engenheiro químico do MIT Kwanghun Chung estão anunciando uma nova maneira de fazer com que os anticorpos de rotulagem perfuem os tecidos fixos mais uniformemente, silenciando a reatividade desses anticorpos enquanto difundem através do tecido fixo e depois restaurando gradualmente a reatividade. Chung ajudou a inventar o Clareza do método de limpeza de tecidos Mais de uma década atrás e continuou a desenvolver métodos de imagem de fluorescência baseados em anticorpos. O novo método depende de um ambiente de partida altamente básico e de um detergente, ácido desoxicólico, para inibir a ligação ao alvo do anticorpo e usa um Campo elétrico rotativo desenhar as proteínas carregadas negativamente através de uma amostra de tecido poroso mais rapidamente do que se moveria por difusão. O ácido desoxicólico é gradualmente removido por diálise e o pH é reduzido por uma reação de oxidação no tampão, que restaura a capacidade dos anticorpos de vincular seus alvos. Os pesquisadores demonstram que o método atinge a marcação de neurônios de célula única em um cérebro de rato intacto e que eles são capazes de estudar vários alvos de proteínas por vez em cérebros, outros órgãos e embriões inteiros. Para rotular uma amostra de tecido maior, como um cérebro humano inteiro, eles precisariam encontrar uma maneira de difundir o excesso de calor do eletrotransport.
