Sejamos honestos, todos nós já tivemos dúvidas sobre materiais autoclaváveis em algum momento e nos perguntamos “Posso autoclavar isso?”
A autoclavagem garante que nossos equipamentos de laboratório, meios e outros artigos estejam livres de contaminação.
No entanto, nem tudo é seguro para autoclave.
Alguns materiais não suportam as condições de alta temperatura e pressão da autoclave, por isso é importante ter um conhecimento profundo dos materiais seguros para autoclave e evitar o erro de colocar o artigo errado sob o calor.
Neste artigo, detalharemos os diferentes itens de laboratório que são seguros para autoclave e aqueles que não são, e explicaremos por que alguns itens nunca devem ser colocados na autoclave.
A maioria de nós sabe como funcionam as autoclaves (Figura 1). Vapor saturado sob alta pressão, normalmente de 121°C a 134°C, faz a esterilização.
Esta combinação de pressão e alto calor permite a morte de microorganismos como bactérias, vírus, fungos e até mesmo os esporos muito flexíveis. É mais eficaz que o calor seco, permitindo matar micróbios com mais eficiência.
Figura 1. Uma autoclave
Também tem a vantagem de poder esterilizar sólidos e líquidos e objetos de laboratório de formatos engraçados.
Alguns dos fluxos de trabalho mais comuns no laboratório que requerem autoclavagem incluem:
Preparação de meios para microrganismos, cultura de células e cultura de tecidos vegetais;
Preparação de soluções estéreis para utilização em diversas técnicas de biologia molecular;
Esterilização de ferramentas e equipamentos como pontas de pipetas, para uso em experimentos;
Esterilização de resíduos de laboratório antes do descarte.
No entanto, nem todos os materiais e recipientes são compatíveis com a autoclavagem.
Alguns materiais podem perder a sua viabilidade, integridade estrutural e forma, e podem degradar-se sob condições de autoclave. Então, quais materiais podem ser autoclavados?
Os seguintes materiais podem ir com segurança para a autoclave e podem até ser reautoclavados:
Artigos plásticos: Os copolímeros de polipropileno (PP) ou polipropileno são seguros para serem repetidamente autoclavados. Eles podem suportar o calor. Geralmente, pontas de pipetas, frascos, béqueres, tubos de centrífuga (MCTs) e frascos de Buchner podem ser autoclavados com segurança. Dica profissional: Sempre verifique se o rótulo ‘Autoclavável’ ou se a qualidade do materials é Polipropileno para garantir que o plástico seja seguro para autoclave.
Vidraria:Vidraria de borosilicato é totalmente seguro para ser autoclavado, pois pode suportar choques térmicos. Tubos de ensaio, béqueres, frascos cônicos, pipetas de vidro e placas de petripla são alguns exemplos de artigos de vidro que podem ser autoclavados. Dica profissional: Verifique o rótulo de Borossilicato antes de colocar a vidraria na autoclave.
Instrumentos metálicos: O aço inoxidável e as ligas resistentes ao calor são seguros para autoclave. Ferramentas cirúrgicas, pinças, espátulas e bisturis são comumente esterilizados em autoclave.
Mídia: A maioria dos tipos de meios de cultura pode ser autoclavada em plástico ou vidro borossilicato. No entanto, devem ser tomadas precauções para garantir que os componentes que não são autoclaváveis sejam esterilizados separadamente.
Vamos expandir quais tipos de mídia e caldos são seguros sob o calor.
A maioria dos meios de cultura comumente usados em laboratório exige uma etapa inicial de esterilização na autoclave, para garantir que estejam livres de contaminação.
Meios de cultura em caldo líquido como LB são seguros para autoclave;
Meios de cultura sólidos contendo ágar são primeiro autoclavados e colocados em petripplacas;
Os meios de cultura de tecidos vegetais são autoclavados antes do uso;
Os meios de cultura celular também são autoclavados primeiro para garantir que estejam livres de micróbios.
As mídias e soluções mais comuns incluem:
Caldos nutritivos e ágar: Ágar nutriente, caldo e ágar Luria-Bertani, ágar e caldo tríptico de soja, ágar MacConkey, ágar SS, ágar EMB, ágar MSA e quase todos os tipos de meios seletivos e diferenciais podem ser autoclavados com segurança. Os componentes de cada um desses meios especializados podem suportar altas temperaturas e pressões.
Soluções e buffers: Tampões como PBS (solução salina tamponada com fosfato), tampão tris, tampão de acetato de sódio, soluções de NaCl e água (Millipore, MilliQ, Destilada) podem ser autoclavados. Dica profissional: Sempre use garrafas ou recipientes de vidro resistentes ao calor ao autoclavar meios líquidos. Tampe frouxamente os recipientes para evitar o acúmulo perigoso de pressão dentro da garrafa.
Agora vamos falar sobre o que deveria não vá para a autoclave.
Quando colocados sob alta temperatura, alguns itens de laboratório podem prejudicar o indivíduo (você) e o instrumento. Em última análise, se a autoclave não funcionar, atrasará o trabalho de todos.
Além disso, nem todos os materiais podem suportar condições de autoclavagem, e a autoclavagem fará com que eles se degradem, levando ao fracasso experimental.
Alguns dos artigos importantes que devem ser evitados incluem:
Artigos plásticos: Polietileno (PE), poliestireno (PS) e os plásticos mais comuns não podem ser autoclavados devido aos seus pontos de fusão e suavidade relativamente baixos.
Vidraria: Vidros sem borosilicato e cal sodada são proibidos na autoclave. Eles podem rachar ou explodir.
Para artigos de plástico e vidro, geralmente é fácil distinguir o que não colocar na autoclave, pois normalmente vêm com rótulos. No entanto, é importante tomar precauções extras com meios, produtos químicos e solventes (veja abaixo).
Solventes: Este é simples. Não autoclave solventes orgânicos. São coisas como acetona, fenol e álcool isopropílico. Da mesma forma, não autoclave compostos voláteis, especialmente se eles produzirem vapores tóxicos ou prejudiciais.
Compostos radioativos: Alguns fluxos de trabalho de laboratório de biologia requerem compostos radioativos. Seu uso é estritamente controlado e nunca devem ser autoclavados, pois isso representa um risco extremo de dispersão caso o recipiente vaze na autoclave.
Soluções de água sanitária e hipoclorito: Essas soluções serão estéreis e não deverão precisar de esterilização de qualquer maneira (veja a regra geral abaixo). Além disso, aquecê-los irá gerar vapores corrosivos, cuja exposição prejudicará os pulmões e geralmente será prejudicial para você.
Mídia: Certas soluções e meios podem potencialmente perder a viabilidade sob a temperatura da autoclave. Uma lista desses itens comuns é fornecida abaixo:
Solução de açúcar e carboidratos: Embora concentrações mais baixas de açúcar sejam geralmente autoclaváveis, altas concentrações de glicose, sacarose, lactose e maltose não são recomendadas para serem autoclavadas devido à capacidade do açúcar de caramelizar e perder sua propriedade.
Antibióticos e meios contendo antibióticos: Quase todos os tipos de antibióticos como Ampicilina, Cloranfenicol, Tetraciclina e Canamicina são sensíveis ao calor e não podem ser autoclavados. Meios contendo antibióticos também não podem ser autoclavados. Geralmente, os antibióticos são adicionados assepticamente mais tarde ao meio autoclavado ou após o resfriamento do ágar até 50°C.
Soro e meio contendo soro: FBS, soro de cavalo, and so on., não podem ser autoclavados porque contêm proteínas que podem desnaturar a temperaturas tão elevadas.
Vitaminas, aminoácidos, nucleotídeos, lipídios, enzimas, hormônios: Estas substâncias bioativas perdem a sua viabilidade e podem decompor-se em subprodutos levando à sua perda de função. Qualquer mídia que os contenha não deve ser autoclavada.
Ácidos e solventes orgânicos: Ácidos como acetona, etanol e clorofórmio são altamente inflamáveis e apresentam alto risco de explosão ou incêndio.
Para fácil referência, criamos um guia rápido para autoclaváveis e não autoclaváveis na tabela abaixo. Por que não colar uma foto dele no closing do seu livro de laboratório?
Tabela 1. Um resumo de materiais de laboratório autoclaváveis e não autoclaváveis.
Pontas de pipeta e caixas de pontas
Artigos plásticos à base de PP
Tubos de centrífuga
Instrumentos cirúrgicos
Garrafas de borosilicato
Água
Mídia de crescimento
Soluções salinas e tampões
Itens de laboratório de aço inoxidável, como espátulas e colheres
Artigos plásticos à base de PS e PE Soluções inflamáveis Solventes orgânicos Materiais corrosivos ou tóxicos, como ácidos e bases Soluções de água sanitária e hipoclorito Materiais radioativos Soluções bioativas contendo enzimas, hormônios e vitaminas.
Uma regra geral: é estéril mesmo?
O objetivo de autoclavar algo é matar o crescimento microbiano para evitar que interfira em seus experimentos.
A maioria dos produtos não autoclaváveis listados acima são naturalmente estéreis e usados para matar micróbios (álcoois, alvejantes, and so on.)
Portanto, eles nunca precisarão ser autoclavados!
Antes de colocar soluções na autoclave pense sempre:
Alguma coisa pode crescer nele? Afinal, isso mata micróbios?
Se as respostas forem “não” e “sim”, respectivamente – não autoclave.
O que você deve fazer se autoclavar algo ruim?
Erros acontecem em laboratórios. Se algo não autoclavável for colocado sob alta temperatura e pressão, pode causar degradação ou risco de contaminação. Erros durante a autoclavagem são administráveis se ações imediatas forem tomadas para garantir a segurança dos equipamentos e dos indivíduos.
Algumas ações que podem ser tomadas durante tais situações incluem:
Primeiro, não entre em pânico. Caso tenha colocado algo não autoclavável, não abra imediatamente a autoclave sem verificar as condições de pressão e temperatura. Desligue a autoclave, deixe esfriar, deixe a pressão cair para zero e certifique-se de não abri-la com alta pressão, pois pode causar queimaduras significativas. Lembre-se sempre de que sua segurança está em primeiro lugar;
Se a temperatura e a pressão estiverem próximas da ambiente, calce luvas, abra a autoclave e retire os artigos com segurança;
Verifique a natureza do merchandise que não é adequado para autoclavagem. Ou seja, se fosse mídia, produtos químicos ou plásticos. Tomar ações orientadas com a ajuda de um responsável pela segurança;
Verifique se há vapores e odores suspeitos e relate qualquer coisa com a qual você não esteja satisfeito ao seu responsável pela segurança;
Certifique-se de que a câmara da autoclave esteja limpa para evitar maiores danos ou reautoclavagem acidental de materiais incompatíveis.
É importante conhecer as propriedades básicas dos materiais e soluções antes de colocá-los na autoclave para evitar qualquer risco de danos e evitar sempre artigos sensíveis ao calor.
Seguindo os protocolos corretos, podemos garantir a esterilização eficaz do seu equipamento de laboratório usando a autoclave.
